Оценка жизнеспособности, подсчет и идентификация клеток
После проведения сепарации (выделения) необходимо определить в каком состоянии и какое количество клеток удалось забрать.
Определение жизнеспособности может проводиться различными методами. Наиболее простым является добавление специальных красителей, которые проникают внутрь клетки только при повреждении её оболочки. Таким образом, окрашенные клетки признаются не жизнеспособными. Естественно, краситель добавляется не в весь полученный материал, а только в его образец с последующим расчетом уровня жизнеспособности всех забранных клеток.
Более сложные и точные методики оценки жизнеспособности сводятся к определению возможности клеток осуществлять свои функции. Для этого в первичной культуре вычисляют уровень содержания специфических веществ, которые вырабатываются клетками в нормальном состоянии. Снижение концентрации этих веществ указывает на то, что внешне неповреждённая клетка может оказаться функционально неполноценной, то есть не пригодной для дальнейшего использования. Хорошие биотехнологические лаборатории (в частности, МЦБ «Биостэм») способны получить в первичной культуре до 70-80% жизнеспособных клеток.
После определения жизнеспособности производят подсчёт количества живых клеток в специальных камерах либо с использованием лазерного цитометра. МЦБ «Биостэм» для этой цели применяет проточный лазерный цитофлюориметр фирмы "Becton Dickinson".
Ещё одним важным аспектом является идентификация полученных клеток, то есть определение какие конкретно клетки получены. Для этого используют специальные реактивы (моноклональные антитела), которые могут связываться только с определёнными типами клеток (см. также раздел «сепарация»).
